本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：                                                          48T

50ng/L - 1600 ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中骨鈣素（OC）含量,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠骨鈣素（OC）水平,。用純化的大鼠骨鈣素（OC）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入骨鈣素（OC）,，再與HRP標記的骨鈣素（OC）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠骨鈣素（OC）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠骨鈣素（OC）濃度。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間好控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排加樣,。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月

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