1.目的：本規(guī)程旨在為無菌操作及無菌室的保護(hù)提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程。

　　2.適用范圍：生測實(shí)驗(yàn)室

　　3.責(zé)任者：QC主管生測員

　　4.定義：無

　　5.安全注意事項(xiàng)：嚴(yán)格無菌操作,，防止微生物污染;操作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈,。

　　6.規(guī)程

　　6.1.無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間,，無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級,，室內(nèi)溫度保持在20-24℃,，濕度保持在45-60%,。超凈工作臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級,。

　　6.2.無菌室應(yīng)保持清潔,，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染,。

　　6.3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染,，已污染者應(yīng)停止使用。

　　6.4.無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液,，如5%的甲酚溶液,，70%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液,，等等,。

　　6.5.無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求,。

　　6.6.需要帶入無菌室使用的儀器,，器械，平皿等一切物品,，均應(yīng)包扎嚴(yán)密,，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。

　　6.7.工作人員進(jìn)入無菌室前,，必須用肥皂或消毒液洗手消毒,，然后在緩沖間更換專用工作服,，鞋，帽子,，口罩和手套(或用70%的再次擦拭雙手),，方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作。

　　6.8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上,，并且同時(shí)打開超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng),。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無菌室,，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘,。

　　6.9.供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整,，不得開啟,，以防污染。檢查前,，用70%的酒精棉球消毒外表面。

　　6.10.每次操作過程中,，均應(yīng)做陰性對照,，以檢查無菌操作的可靠性。

　　6 .11.吸取菌液時(shí),，必須用吸耳球吸取,，切勿直接用口接觸吸管。

　　6.12.接種針每次使用前后,，必須通過火焰灼燒滅菌,，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物,。

　　6.13.帶有菌液的吸管,，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒,，24小時(shí)后取出沖洗,。

　　6.14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3%的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘,，再做處理,。工作衣帽等受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫去,，高壓蒸汽滅菌后洗滌,。

　　6.15.凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后,，才能在水龍頭下沖洗,，嚴(yán)禁污染下水道,。

　　6.16.無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺(tái)開啟的狀態(tài)下,，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干,，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，放至凝固后,，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),，證明無菌后，取平板3～5個(gè),，分別放置工作位置的左中右等處,，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),，取出檢查,。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個(gè)菌落，10000級潔凈室平均不得超過3個(gè)菌落,。如超過限度,，應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止,。

　　7.參照 《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》 《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》中 (無菌檢查法)章節(jié) 中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

　　YY/T0188.6-1995《藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程》

　　8.分發(fā)部門 質(zhì)量管理部

　　無菌室技術(shù)指導(dǎo)說明

　　在獲得了無菌環(huán)境和無菌材料后,，我們還要保持無菌狀態(tài)，才能對某種特定的已知微生物進(jìn)行研究或利用它們的功能,，否則外界的各種微生物很容易混入,。外界不相干的微生物混入的現(xiàn)象，在微生物學(xué)中我們叫做污染雜菌,。防止污染是微生物學(xué)工作中十分關(guān)鍵的技術(shù),。一方面是徹底滅菌，另一方面防止污染,，是無菌技術(shù)的兩個(gè)方面,。另外，我們還要防止所研究的微生物,，特別是致病微生物或經(jīng)過基因工程改造了的本來自然界不存在的微生物從我們的實(shí)驗(yàn)容器中逃逸到外界環(huán)境中去,。為了這些目的，在微生物學(xué)中,，有許多措施,。

　　無菌室一般是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間?？梢杂冒宀暮筒ＡЫㄔ?。面積不宜過大，約 4 — 5 平方米即可，高2.5 米左右,。無菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間,，緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向，以免氣流帶進(jìn)雜菌,。無菌室和緩沖間都必須密閉,。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置。無菌室內(nèi)的地面,、墻壁必須平整,，不易藏污納垢，便于清洗,。工作臺(tái)的臺(tái)面應(yīng)該處于水平狀態(tài),。無菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無菌室的紫外線燈距離工作臺(tái)面1米,。工作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)穿滅過菌的服裝,，戴帽子。

　　當(dāng)前無菌室多存在于微生物工廠,，一般實(shí)驗(yàn)室則使用超凈臺(tái),。超凈臺(tái)其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過電動(dòng)裝置使空氣通過高效過濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面,，使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無菌空氣控制之下,。而且在接近外部的一方有一道高速流動(dòng)的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入。

　　在條件較困難的地方,，也可以用木制無菌箱代替超凈臺(tái)。無菌箱結(jié)構(gòu)簡單,，便于移動(dòng),，箱正面開有兩個(gè)洞，不操作時(shí)用推拉式小門擋住,，操作時(shí)可以將雙臂伸進(jìn)去,。正面上部裝有玻璃，便于在內(nèi)部操作,，箱內(nèi)部裝有紫外線燈,，從側(cè)面小門可以放進(jìn)去器具和菌種等。

　　無菌操作技術(shù)當(dāng)前不僅在微生物學(xué)研究和應(yīng)用上起著舉足輕重的作用,，而且在許多生物技術(shù)中也被廣泛應(yīng)用,。例如轉(zhuǎn)基因技術(shù)、單抗體技術(shù)等,。

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